Contrôle génétique et environnemental
de la respiration des levures

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Objectif de connaissance. Rôle du glucose dans la respiration et contrôle du métabolisme par le patrimoine génétique et l’environnement.
Activité  Capacités - Exigences - Conseils
Réaliser
la manipulation proposée.
Manipuler et expérimenter (selon un protocole et un matériel fournis)
- Respecter les consignes du protocole et d'utilisation du matériel.
- Organiser le plan de travail.
Rédiger
le compte-rendu en utilisant un logiciel de traitement de texte. Imprimer le compte-rendu.

Communiquer
- Appeler le professeur avant connecter la LabQuest à un ordinateur supportant Logger Pro (autoriser plusieurs récupérations).
- Annoter et titrer le graphique.
- Copier/Coller le graphique dans Word.
Recenser, extraire et organiser des informations
- Mettre en relation les données de la manipulation et des documents proposés.
- Calculer la consommation de dioxygène par minute avec ou sans glucose.
Montrer que l'activité respiratoire dépend de l'apport en glucose (en s'appuyant sur le document 1 proposé et sur la manipulation).
- Montrer que l'activité respiratoire est contrôlée par l'information génétique (en s'appuyant sur le document 2 proposé).
- Utiliser la fiche méthode.

Matériel

Polycopiés
- 1 fiche élève par élève.
- 18 fiches poste

La veille du TP
- Préparer une suspension de levures (levure fraîche à 10 g/L ou levure lyophilisée à 2,5 g/L).
- Mettre la suspension en agitation (agitateur magnétique) et faire buller de l’air (bulleur d’aquarium) pendant 2 heures.
- Laver les levures : filtrer, décanter ou centrifuger et remettre les levures dans de l’eau distillée à la même concentration.
- Maintenir l'agitation et l'aération jusqu’au lendemain.
- Laver à nouveau le jour de la manipulation.

Matériel pour la classe
- 1 L de suspension de levure fraîche de boulangerie à 10 g/L (levure fraîche de chez Leclerc)
- 100 mL de solution de glucose à 10 g/L
- 1 vidéoprojecteur + câble VGA
- Fiches élèves sur le bureau professeur.

Matériel par table
- 1 ordinateur (logiciel Logger Pro)
- 1 console LabQuest + câbles micro USB
- 1onde à dioxygène
- 1 potence
- 1 réacteur Jeulin OU 1 bécher 100 mL forme haute, 1 agitateur magnétique, 1 potence avec pince
- 1 seringue 1 ou 2 mL
- 2 fiches postes sous pochette plastique


Commentaire

Protocole élèves (d’après TP de biologie, D. POL, Bordas 1994, p. 132).
- Remplir le réacteur d’une suspension de levures affamées à 10 g/L (80 mL pour un bécher de 100 mL).
- Placer la sonde à dioxygène.
- Paramétrer la console LabQuest (t = 20 min).
- Lancer les mesures.
- À t = 3 min injecter très doucement 1 mL de solution de glucose à 10 g/L
- Attendre la fin de la manipulation (pendant ce temps commencer l'exploitation du document 2).

Exploitation
- Connecter LabQuest à un ordinateur supportant Logger Pro (autoriser plusieurs récupérations)
- Possibilité : Insérer / Annotation(s)
- Possibilité d'imprimer, etc.

Exemple d'enregistrement
- Version Logger Pro - Version Word
Dans cet enregistrement, une deuxième injection de 1 mL de solution de glucose à 10 mg/L est effectuée à 900 secondes (artefact d'injection).

Données scientifiques
L’activité respiratoire est maximale avec le glucose et le saccharose, nettement inférieure avec le maltose. Le lactose n’est pas un substrat de la respiration.
Souche rho+ : souche de levure comprenant un ADN mitochondrial intact et fonctionnel comme dans des souches sauvages.
Souche rho0 : souche de levure dépourvue d’ADN mitochondrial, caractérisée par une incapacité de croissance dans un milieu contenant une source de carbone non fermentescible et une absence de synthèse protéique mitochondriale.
Souche rho- : souche de levure comprenant une large délétion du génome mitochondrial, phénotypiquement équivalente aux souches rho0.

Autres manipulations possibles
- Mise en évidence de l'activité métabolique cellulaire : vert janus (colorant spécifique des mitochondries actives, cf. TP de Biologie des levures de D. Pol) et bleu de méthylène sur levures ; nitrate d'argent sur cellules chlorophylliennes.
- Bleu de méthylène, colorant vital : les cellules vivantes sont colorées en bleu clair, les cellules mortes en bleu foncé : cette technique permet d'apprécier de façon assez précise le pourcentage de cellules mortes contenues dans une suspension de levure.
-
Mise en évidence du contrôle du métabolisme par le patrimoine génétique : cultures de levures « petites » et « grandes » (rythme de division et propriétés cytoplasmiques).
- Montrer la notion de transformations chimiques dans la cellule : culture sur milieu minéral ou organique et observation d'une production de matière (culture de levures et mesure de la population par EXAO - colorimétrie - ou comptage, etc.).
- Échange d'énergie et activité métabolique des cellules : mesure de la température au sein de cultures de levure en milieu aérobie et anaérobie.